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質(zhì)譜是怎么做到定量分析的?

更新時(shí)間:2022-10-11      點(diǎn)擊次數(shù):1695

質(zhì)譜的定量和紫外檢測器,蒸發(fā)光檢測器沒什么本質(zhì)區(qū)別,只不過質(zhì)譜的線性范圍比較令人抓狂而已。當(dāng)然還有一系列的問題,比如說特別是很多生物分析的樣品,你稀釋十倍之后很可能質(zhì)譜信號的強(qiáng)度不會下降十倍。1ppm對應(yīng)的離子計(jì)數(shù)為一萬,0.1ppm對應(yīng)的離子計(jì)數(shù)不是一千而很可能是五千三千。


質(zhì)譜信號強(qiáng)度與待分析物含量的關(guān)系


任何定量分析方法都需要建立實(shí)驗(yàn)測量信號與待分析物的量的關(guān)系。很幸運(yùn)的是,在質(zhì)譜中,通常也可以建立這樣的關(guān)系,因此質(zhì)譜信號是可以用于定量的。從題主的說明來看,Ta的疑惑主要在這里。既然問題是“質(zhì)譜是怎樣做到定量的?",我們不妨把質(zhì)譜信號的產(chǎn)生按時(shí)間順序粗略分為三個(gè)步驟,即離子的產(chǎn)生,傳輸與檢測。


1. 產(chǎn)生離子時(shí),不同樣品分子的電離通常是相互獨(dú)立的。因此樣品量越多,其產(chǎn)生的離子也就越多。目前常用的各種離子化方法(EI、ICP、ESI、MALDI等)在實(shí)驗(yàn)中(嚴(yán)格來說僅在一定濃度范圍內(nèi)——術(shù)語是動(dòng)態(tài)范圍,dynamic range)都至少滿足樣品量與產(chǎn)生離子量的正相關(guān),一般情況下也可以進(jìn)一步近似成線性相關(guān)。


2. 傳輸離子時(shí),簡單來說可以認(rèn)為傳輸效率與被傳輸離子的量無關(guān);(嚴(yán)格地說,被傳輸?shù)碾x子太多時(shí),相同電荷的互相排斥會造成離子束的“體積"變大,導(dǎo)致傳輸效率下降。這種影響在空間有限的離子阱中表現(xiàn)得更加明顯,因此在離子阱質(zhì)譜中一個(gè)重要的技術(shù)就是適當(dāng)控制進(jìn)入儀器的離子數(shù)量,使其既不太少也不太多。)


3. 檢測離子時(shí),不論是使用光電倍增管的檢測器,還是檢測鏡像電流的檢測器(ICR/Oribtrap),其信號強(qiáng)度(在一定范圍內(nèi))均與離子數(shù)量大致線性相關(guān)。


廢話幾句,可能會使題主感覺質(zhì)譜不能定量的原因之一是,我們看到的質(zhì)譜圖常用相對強(qiáng)度作為縱坐標(biāo),即0-100%強(qiáng)峰,而不展示信號的絕對強(qiáng)度。但在做質(zhì)譜的時(shí)候,儀器記錄的當(dāng)然是絕對強(qiáng)度(相對強(qiáng)度也是通過絕對強(qiáng)度換算出來的)。我們需要用絕對強(qiáng)度來定量時(shí),就需要這部分平時(shí)不??吹男畔⒘?。


另外,在談到色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法時(shí),待分析物與實(shí)驗(yàn)測量信號的關(guān)系之中又多了一層色譜,即待分析物含量->色譜流出物中樣品含量->質(zhì)譜信號。與EI譜圖分析以相對強(qiáng)度為主不同,在色譜-質(zhì)譜聯(lián)用時(shí),信號的絕對強(qiáng)度就成了我們天天都要關(guān)心的內(nèi)容,因?yàn)橘|(zhì)譜信號強(qiáng)度隨時(shí)間的變化就是實(shí)驗(yàn)的色譜圖,通常以總離子強(qiáng)度或者某一特定質(zhì)荷比離子的強(qiáng)度作圖。


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